網織紅細胞分析法
網織紅細胞是介于晚幼紅細胞和成熟紅細胞之間的不成熟紅細胞,通常較成熟紅細胞稍大,其胞質中尚殘存部分嗜堿性物質(RNA、核糖體),經堿性染料染色后可見深染的網狀結構,故名。
網織紅細胞計數是用作紅細胞產生或紅細胞生成的指標,是診斷或監測貧血治療最常用的臨床指標。流式細胞術測量網織紅細胞不但大大提高了網織紅細胞計數的準確性和精確性,還能提供一些反映網織紅細胞成熟度和大小的非傳統參數。臨床研究已經開始將這些非傳統參數應用于許多貧血性疾病的診斷和治療。
近年來,許多中、高端血細胞分析儀都配有自動的網織紅細胞分析功能。網織紅細胞的全自動血液分析過程消除了手工涂片、染色和不同技師引起的偏差,可使實驗更標準化。此外,同手工方法計數1000個細胞相比,自動的網織紅細胞分析法分析30000個細胞,大大提高了分析結果的準確性。
1. 在流式通道中,運用VCS三維技術分析染色后的網織紅細胞:低頻波檢測細胞體積,網織紅細胞比成熟紅細胞稍大;高頻波檢測細胞的內部成分,可剔除非紅細胞;激光散射將網織紅細胞與成熟紅細胞區分開來,因為網織紅細胞胞漿含嗜堿性物質,結合染料后散射較多的激光,在散點圖上分布于紅細胞的右側,網織紅細胞成熟度越差,在散點圖上分布越靠右。
2.VCS技術
細胞經染色和漂洗后,采用一種獨特的流式細胞術計數細胞,同時采用體積、傳導性和光散射三維分析來確定網織紅細胞。
體積檢測用于確定成熟紅細胞和網織紅細胞的大小。體積的信息對于區分網織紅細胞非常重要,根據定義,未成熟的紅細胞大于成熟的紅細胞。
傳導性或射頻測量提供細胞的內部特性信息, 用于區分體積較小的白細胞。
3.散點圖和輪廓圖形分析
從體積、傳導性和光散射收集的原始資料反映在三維散點圖上。用曲線分離細胞群后,血小板和白細胞被區分,只留下成熟紅細胞和網織紅細胞作進一步分析。輪廓圖形分析以一種非線性的方式將網織紅細胞從成熟紅細胞中區分出來,這種非線性方式是沿著細胞群的曲線而不是直線。
4.網織紅細胞參數
血細胞分析系統中顯示的網織紅細胞參數是用作判斷儀器故障的工具,并有助于對散點圖進行解釋。
根據直方圖顯示的256通道中的體積,傳導性和光散射的分析,可以得到每個細胞群落的相關信息。平均通道值決定了每個細胞群落在散點圖中的實際位置。此外,通過計算得出的標準差決定了每個細胞群落每次檢測的差異程度。平均通道值和標準差都會受到儀器狀態、增益調節、試劑的影響,或者和某些特定的病人樣本相關。
5.網織紅細胞報警
利用復雜的演算,定位參數結合其他細胞群的統計保證結果的完整性并同時給出網織紅細胞報警信息。某些臨床疾病會導致散點圖與已知的成熟紅細胞和網織紅細胞群不相符。這些不典型的細胞群產生的確認網織紅細胞或異常網織紅細胞信息以此來提示實驗室需要進行進一步復查。
網織紅細胞報警信息
6.輪廓圖形分析技術過程
可觀察到一個有高光散射的細胞群落,它們的體積均值比網織紅細胞更接近于成熟紅細胞。這群細胞所具有的高光散射的特性與地中海貧血中常見的未完全溶血(影細胞)的紅細胞一致。這個細胞群可能會因為疾病的異源性和病人的狀況不同變得不明顯或非常顯著。
鐮狀細胞標本中紅細胞的形狀和大小多樣,其網織紅細胞和成熟紅細胞的體積均值和標準差均會升高。這個細胞群可能會因為疾病的異源性和病人的狀況不同變得不明顯或非常顯著。
正常 鐮形紅細胞 小體積細胞
正常和異常網織紅細胞散點圖
在散點圖中,可觀察到一個大體積的細胞顆粒群,它們的光散射均值比網織紅細胞更接近白細胞。已經發現這群細胞是小體積白細胞群延續出的一部分,可能是碎片或破碎的白細胞。
7.網織紅細胞的相關參數
貝克曼庫爾特通過自動的網織紅細胞分析和流式細胞術測量光散射為網織紅細胞群提供了更多的細節。網織紅細胞群可進一步被分成10個成熟度。含有最多RNA的網織紅細胞位于最強光散射區,3到10區。
此外,VCS技術測量網織紅細胞還可得出以下參數:網織紅細胞百分比(RET%)和網織紅細胞絕對值(RET#),未成熟網織紅細胞指數(Immature Reticulocyte Fraction, IRF),平均網織紅細胞體積( Mean Reticulocyte Volume, MRV),平均球形細胞體積(Mean Sphered Cell Volume, MSCV),和高光散射網織紅細胞參數(High Light Scatter Reticulocyte, HLR% & HLR#)。
8. 未成熟網織紅細胞指數 (IRF)
定義為幼稚的或未成熟的網織紅細胞與總的網織紅細胞的比值。未成熟的網織紅細胞較大,按照光散射分類就是那些有最強光散射特性,即最多RNA的網織紅細胞。
9. IRF的臨床應用
正常情況下IRF占網織紅細胞總數的不足5%。未成熟網織紅細胞在大量的促紅細胞生成素的刺激下會釋放到外周血中,如出血,某些貧血或對刺激骨髓造血治療的反應。IRF類似于中性粒細胞的核左移,能夠提供額外的紅細胞信息,這些信息可以縮短疾病從診斷到治療或單純的治療時間。
大量文獻已表明,IRF結合網織紅細胞計數可提高貧血分類,監測骨髓恢復及貧血治療情況。
近年來先進的技術為臨床醫生提供了更精確的網織紅細胞計數和更有價值的新的網織紅細胞參數。最有前景的一個新參數是未成熟網織紅細胞指數,它在指導臨床實踐方面具有實用的臨床意義。此外,MSCV和MCV的相關性在提示遺傳性球形紅細胞增多癥方面有重要的意義。

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